血清标本运送前应在0-8℃保存,血清可以冷冻保存,但应避免反复冻融。不能冷冻全血。
送血时应填写标本送检表。
1.2 鼻咽拭子/鼻咽分泌物
采出疹3日内的咽拭子标本,或出疹前3日的标本。
使用的棉拭子和试管等应灭菌。
棉拭子深入咽部,应轻擦咽部或柯氏斑处数次。
将棉拭子剪去用手握过的木(竹)棍后放入无菌试管中,试管内可放5%牛血清的MEM维持液(PH7.0),立即4℃运输,最好-70℃保存。
1.3 尿液标本
用无菌的离心管收集10-50ml尿液,但不收集晨尿,在4℃下1500转/分钟离心5分钟,弃去上清液将沉淀物吸出放入含5%牛血清的MEM(PH7.0)和10倍常规用量的青、链霉素(1000μ/ml)标本液中,立即放入低温冰箱保存。注意尿液标本在离心前不要冷冻。
2. 标本运送
2.1 血清标本
标本采集后应尽早送到实验室,不要等其它标本。
使用有外螺旋盖的血清管保存血清标本,并有标签,放进塑料袋中密封。将塑料袋放入冷藏包或冰壶。
在0-4℃环境下运送。
送标本时附带标本送检表。
如遇节假日应事先通知实验室,说明标本送达时间。
2.2 鼻咽拭子/鼻咽分泌物
标本采集后立即4℃保存。24小时能送到省级实验室的,4℃运输,否则-70℃保存。
严防标本污染或容器渗漏。
避免日光照射。
其它同血清标本。
3. 捕捉法ELISA检测IgM抗体
参见国标麻疹诊断标准及处理原则(GB15983-1995)附录C4。
4. 病毒分离方法
细胞:一般用Vero/SLAM细胞分离麻疹病毒,亦可用Vero细胞、人胚细胞等。
接种标本方法:用静置法培养于36-37℃中观察10天。
出现细胞病变后(尤其是融核细胞后),可用标准血清(或单克隆抗体)中和鉴定或用RT-PCR法鉴定。SLAM细胞分离麻疹病毒,36-37℃中观察7~10天。不出现病变的,盲传
用Vero/3代,阴性者定为阴性。
方法学同一般病毒分离、鉴定方法。
5. 质量控制
血清IgM检测应严格按操作规程进行。
开展检测前,工作人员要经过培训合格后上岗。
对暴发检测为阴性的血清,必须尽早送省(国家)实验室复核。
省级实验室每年对地区实验室抽检部分血清。
国家实验室每年对省级实验室抽检部分血清。
病毒分离必须在省级实验室进行。
分离到的病毒必须送国家实验室进一步鉴定,做病毒基因的序列分析,以确定其基因型别特征,追寻其传播来源。
附3
2008年
麻疹监测网络实验室检测工作月报表
月份
| 检测情况
| 下月试剂计划
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麻疹-IgM
| 风疹-IgM
| 3天检测情况
| 5天检测情况
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检测份数
| 阳性
| 阳性率(%)
| 试剂
| 检测份数
| 阳性
| 阳性率(%)
| 试剂
| 检测数
| 检测及时率(%)
| 检测数
| 检测及时率(%)
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1
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2
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3
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5
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6
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7
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8
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9
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合计
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