取供试品溶液1.6ml置于已加1.5gNaCl的试管中，加正丁醇4.0ml、2.5mol/L氢氧化钠溶液0.2ml，立即混匀5分钟，静置后，取出3.6ml正丁醇相，加到已装有1.2ml的0.1mol/L盐酸溶液和2.0ml正庚烷的试管内，震荡5分钟，弃有机相，取出1.0ml盐酸相加入等体积水，再加0.4mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，混匀并迅速加入0.1%邻苯二甲醛甲醇液0.1ml，立即混匀，置21～22℃、10分钟，加0.5mol/L盐酸0.5ml终止反应。取96孔酶标板，每孔加入上述经盐酸终止反应的溶液200μl，用荧光酶标仪，在激发波长350nm和荧光波长450nm下测吸光度。
精密量取100ng/ml磷酸组织胺标准工作液1.0ml、0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0.1ml、0.05ml和0.025ml，并以0.1mol/L盐酸溶液补足至1.0ml；向各管中加水0.5ml和25%三氯乙酸溶液0.1ml混匀，以后操作同供试品。
4 结果计算
将标准液磷酸组织胺含量对其相应的吸光度做直线回归，求得直线回归方程。将供试品吸光度代入直线回归方程求出供试品溶液碱基含量（G），按下式计算供试品游离组胺含量。
供试品游离组胺含量（ng/ml）＝G×2.76×2.5（稀释倍数）
【附注】 磷酸组胺分子量为307.148，标准液浓度按碱基计，碱基与磷酸组胺分子量比为1：2.763。
附件3： 注射用抗乙型肝炎转移因子制造及检定规程
RequirementsforAnti-HBVTransferFactorforInjection
本品用经乙型肝炎疫苗免疫的健康猪的脾脏和淋巴结，以冻融法破碎细胞，通过离心、超滤、巴氏消毒法等方法精制后制成的冻干制剂。
1 基本要求
1.1 设施与生产质量管理
按中国《
药品生产质量管理规范》的要求实施。
1.2 原料及辅料
应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求，未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。
1.3 生产用水
生产用水源水应符合国家饮用水标准；纯化水及注射用水应符合现行《中国药典》标准。
1.4 生产用器具
直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗、去热原质处理或灭菌处理。
2 制造
2.1 供体猪要求
2.1.1 供体猪检疫
供体猪应检测无猪瘟病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒、口蹄疫病毒和乙型脑炎病毒污染。如系经疫苗免疫过的猪，应进行抗体检测，结果应为阳性。
2.1.2 对脾脏、淋巴结的要求
经乙型肝炎疫苗免疫后抽血检查HBsAg抗体滴度达1∶40以上或皮试阳性者可摘取脾脏或淋巴结，并在24小时内放入-30℃中保存。有炎症、化脓或坏死变质的脾脏或淋巴结不得使用。
2.2 原液制备
2.2.1 将新鲜或冷冻的脾脏及淋巴结在25℃左右去脂肪及结缔组织，然后用纯化水洗净。
2.2.2 细胞破碎
将洗净的组织切成小块，加入适量注射用水，用组织捣碎机破碎细胞，制成匀浆，加适量注射用水，混匀，置-20℃反复冻融5～8次，融化温度不得超过37℃。
2.2.3 离心分离
将冻融的匀浆离心（离心温度4℃），去沉淀，留上清液备用。
2.2.4 澄清过滤与超滤
上清液用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，然后用截留分子量为5000道尔顿超滤膜进行超滤。
2.2.5 污染病毒的灭活或去除
采用经国家药品监督管理部门批准的方法灭活或去除病毒，即为原液。冻存于-20℃或以下，保存期为2个月。
2.3 原液检定
按3.1项进行。
2.4 半成品制备
2.4.1 配制与除菌
配制时加入适量甘露醇作为稳定剂，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，即为半成品。
2.4.2 分批
应符合本版规程通则《生物制品分批规程》的有关规定。
2.5 半成品检定
按3.2项进行。
2.6 成品制备
2.6.1 分装及冻干
应符合本版规程通则《生物制品分装规程》的有关规定。
2.6.2 规格
每支含多肽2mg。
2.6.3 包装
应符合本版规程通则《生物制品包装规程》的有关规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 无菌试验
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。
3.1.2 pH值
在20℃±2℃测定，pH值应为6.5～7.5。
3.1.3 蛋白质反应
取制品2ml，加20%磺基水杨酸2ml应呈阴性反应。
3.1.4 细菌内毒素
按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》进行。应小于10EU/支。
3.1.5 多肽含量
应不低于1.0mg/ml。
3.1.6 核糖含量
应不低于70μg/ml。
3.1.7 特异活性试验
方法见附录。未粘附细胞抑制指数（NAI）应不低于30%。
3.2 半成品检定
3.2.1 细菌内毒素
按本版规程通则《生物制品细菌内毒素试验规程》进行，应小于10EU/支。
3.2.2 无菌检查
按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。
3.2.3 pH值
在20℃±2℃测定，pH值应为6.5～7.5。
3.3 成品检定
除水分外，其余项目按制品标示量（2.0ml）加入灭菌注射用水溶解后进行检定。
3.3.1 鉴别试验
