附件3

1　范围

　　本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。
　　本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。
　　取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。

2　规范性引用文件

3　原理

　　试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C₈柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。

4　试剂和材料

　　除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。
　　4.1甲醇：农药残留级。
　　4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度≥99%。
　　4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成10.0mg/mL标准贮备溶液。准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500µg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4°C保存。临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。
　　4.3　0.45μm滤膜。

5　仪器

　　5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪（Agilent） - API 4000质谱仪（Applied Biosystems） ， 电喷雾离子化源（ESIMS， NI/PI模式）。
　　5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。
　　5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。
　　5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。
　　5.5 具塞试管：10mL。

6　试样的制备与保存

　　6.1 试样的制备
　　取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。
　　6.2 试样保存
　　制备好的试样置于室温保存。

7　测定步骤

　　7.1样品前处理
　　称取0.1～0.2g样品 （精确到0.001 g） ，置于10mL试管中，加入3.00mL甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡10min。静置，吸取上清液经滤膜（4.3）过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。

　　7.4 测定
　　7.4.1液相色谱条件
　　a）色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C₈，5μm，150×4.2mm；
　　b）柱温：25℃；
　　c）流动相：甲醇＋水（60＋40）， 等度淋洗10min；
　　d）流速：300μL /min；
　　e）进样量：10µL。

　　7.4.2 质谱条件
　　a）离子化方式：热喷雾电离（TSI）；
　　b）扫描方式：负离子扫描；
　　G）检测方式：多反应监测（MRM）；
　　d）碰撞气（CAD）：11.0 psi；
　　e）气帘气（CUR）：14.0 psi；
　　f）雾化气（GS1）：35.0 psi；
　　g）加热气（GS2）：25.0 psi；
　　h）喷雾电压（IS）：-4500V；
　　i）去溶剂温度（TEM）：350°C；
　　j）碰撞室射出电压（CXP）：-16V；
　　k）定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压，见表1。

　　表1氯霉素的定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压

化合物	定性离子对 （m/z）	定量离子对（m/z）	扫描时间 Dwell time（ms）	碰撞气能量 CE（eV）	去簇电压DP（V）
氯霉素	321.0/151.0	321.0/151.0	100	-18	-40
	321.0/255.2		100	-18	-40

　　7.4.3 液相色谱-串联质谱测定
　　7.4.3.1 定性测定
　　用氯霉素的定性离子对（m/z 321.0/151.0和321.0/255.2）进行定性。

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